Reco18研發(fā)團隊在知名期刊《Frontiers In Endocrinology》發(fā)表學術(shù)論文:《含丁香、槐米和山藥天然提取物的化合物通過多種機制提高老齡雌性小鼠的生育能力》,科研團隊通過實驗,展示了專為女性生育而開發(fā)的Reco18是如何改善卵巢功能,并幫助其更好生育的過程。

實驗方法

研發(fā)團隊采取動物實驗,通過超數(shù)排卵、免疫印跡分析、免疫組織化學、活性氧 (ROS) 和線粒體膜電位測量和線粒體分布檢測、體外受精 (IVF)、實時定量 PCR、HE染色和卵泡計數(shù)、小鼠血清激素水平測定、TUNNEL 分析、統(tǒng)計分析等多種技術(shù)手段與方法,觀察到Reco18有效改善了實驗鼠的卵巢功能及提高卵子和囊胚的質(zhì)量和數(shù)量。

實驗結(jié)果分析

1、提高卵母細胞的數(shù)量和質(zhì)量

通過對使用Reco18的實驗鼠排卵后卵母細胞進行計數(shù),并對卵母細胞破碎率進行評估,每只小鼠排出的卵母細胞數(shù)從4. 11 增加到7.64 ,同時卵母細胞的破碎率從30.71%降低到 14.47%結(jié)果表明,Reco18 治療后超排后的卵母細胞數(shù)量增加,且卵母細胞破碎率顯著減少。

使用 ROS 綠色熒光探針標記并檢測卵母細胞的氧化應(yīng)激水平,評估ROS 綠色熒光強度并進行統(tǒng)計分析。結(jié)果表明,Reco18 治療改善了衰老導(dǎo)致的卵母細胞中ROS 水平的增加,排卵后的卵母細胞質(zhì)量得到改善。

2、Reco18改善體外胚胎發(fā)育和生育能力

通過對使用Reco18實驗鼠小組的卵母細胞進行體外受精和胚胎培養(yǎng),以評估其卵母細胞的發(fā)育潛力。

數(shù)據(jù)顯示Reco18對胚胎發(fā)育起到有益作用,具體表現(xiàn)為 4-8細胞期、桑椹胚期和囊胚階段的胚胎發(fā)育率增加。在 4-8-細胞期,其比率從 36.67%增加到 48.48%;桑椹胚期從 23.33%增加到 40. 15%;囊胚期的從 23.33%增加到 48.48%。

在Reco18治療組中,總細胞數(shù)量從平均每個囊胚14.33個細胞增加到25.00個。

結(jié)果顯示,Reco18治療顯著降低了囊胚中的細胞凋亡水平,增加了囊胚中的總細胞數(shù)。

與未使用Reco18的對照組相比,使用Reco18 組的卵巢的原始卵泡、生長卵泡和黃體的百分比更高。

未服用Reco18的小鼠中,只有40%的雌性小鼠產(chǎn)仔,平均每只雌鼠產(chǎn)崽1.6只;而所有接受Reco18 治療的小鼠均有產(chǎn)仔,平均每只產(chǎn)仔8.4只。結(jié)果顯示,Reco18改善了生育能力。

3、Reco18通過促進卵巢顆粒細胞增殖和減少細胞凋亡提高生育能力

科研團隊用PCNA 免疫組化染色檢測小鼠的細胞增殖水平,結(jié)果顯示生長卵泡階段,使用Reco18小鼠的卵泡周圍顆粒細胞數(shù)量高于對照組,Reco18 可以促進顆粒細胞的增殖。

使用蛋白質(zhì)印跡分析對照組和使用Reco18組小鼠卵巢中的細胞凋亡水平,數(shù)據(jù)顯示Reco18 組小鼠的卵巢細胞凋亡水平低于對照組,這表明Reco18可以降低衰老卵巢的細胞凋亡水平。

4、Reco18通過提高血清性激素水平和卵巢激素相關(guān)mRNA 表達來提高生育能力

研發(fā)團隊對高齡小鼠使用Reco18,通過ELISA測定血清AMH、FSH和E2水平。結(jié)果表明,Reco18治療可提高老齡小鼠血清 AMH和E2雌激素水平,AMH水平從376.69ng/L增加到580.61ng/L,E2水平從10.73pg/ml 增加到19.33pg/ml。

通過類固醇激素相關(guān)mRNA表達的qRT-PCR分析,結(jié)果顯示Reco18 治療后卵巢中 Amhr 和 Fshr mRNA 的水平增加。結(jié)果表明,Reco18通過提升卵巢激素相關(guān)mRNA 表達來改善了生育能力。

5、Reco18通過改善卵巢中抗氧化因子和炎性相關(guān)因子的表達來提高生育能力

使用Reco18后的小鼠卵巢中一些抗氧化因子SOD-1 (超氧化物歧化酶 1)、CAT(過氧化氫酶)和GSS(谷胱甘肽合成酶) mRNA的表達增加。

此外,使用達Reco18后,小鼠卵巢中一些炎性因子的表達降低,如 IL-6 、TNFα和iNOS。

總之,Reco18 能有效降低卵巢的氧化應(yīng)激水平,改善其炎性環(huán)境。

6、Reco18安全性試驗

為了測試Reco18 的生物安全性,研發(fā)團隊另外準備了 40周齡的雌性 ICR 小鼠,用 2 倍劑量的Reco18 灌胃一個月,并檢測了兩組小鼠的肝腎功能和血脂等血生化指標及體重指標。結(jié)果表明,用正常劑量和高劑量的Reco18對小鼠進行一個月的灌胃,小鼠體重、肝腎功能和血脂水平?jīng)]有造成毒副作用及不良影響。Reco18在提升生育力的同時,有效保證了食用安全。

結(jié)論

Reco18中含多種天然植物提取物的化合物通過多種機制,可提高血清雌激素水平、促進卵泡生長和成熟、增加抗氧化因子的表達、降低炎性相關(guān)因子的表達以及降低與年齡相關(guān)的卵巢細胞凋亡水平,有效提高了生育能力。目前,關(guān)于Reco18的作用的相關(guān)臨床課題正持續(xù)進行中,未來將公布更多實驗結(jié)果及數(shù)據(jù)。